名称 吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色试剂盒/AO-EB Double Fluorescence Staining Kit
规格 100T
产品组分
Componets Size Storage
试剂(A): AO solution 200μl 4℃ 避光
试剂(B): EB solution 200μl RT
试剂(C): AO/EB Dilution Buffer 50mL 4℃ 避光
自备材料：荧光显微镜，PBS，细胞计数板，载玻片、盖玻片
有效期：12个月
产品简介
吖啶橙(Acridine Orange, AO)属于三环杂芳香燃料，可以标记DNA、RNA,属于异染性荧光染料， AO常用于细胞内DNA和RNA进行检测。AO与核酸结合方式主要有：1、插入性结合，AO嵌入核酸双链的碱基对之间，这种结合方式主要为AO与DNA的结合，其荧光发射峰为530nm，激发后呈绿色荧光；2、静电吸引，带正电荷的AO与单链核酸的磷酸根(带负电荷)产生静电间的吸引结合，这种结合方式主要为AO与RNA的结合，其荧光发射峰为640nm，激发后呈红色荧光，少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光。因此，吖啶橙嵌合到双链DNA分子中显绿色，与DNA单链或RNA结合时发橙红色荧光。
溴化乙锭(Ethidium Bromide,EB)嵌合到双链DNA或RNA的碱基对中，无碱基特异性，发红色荧光。吖啶橙可透过活细胞膜，EB不能通过与活细胞膜具有相同通透性的细胞膜。
操作步骤
1、 AO/EB 工作液的配制：取试剂(A)、试剂(B)、试剂(C)， 按照试剂(A):试剂(B):试剂(C)=1:1:8 的比例稀释成 AO/EB 工作液。
2、 每份细胞样品中加入 AO/EB 工作液 2μl，混合均匀。
3、 低速离心：500g 离心 5min，弃上清。
4、 用 AO/EB Dilution Buffer 重悬细胞，细胞计数，将细胞密度调整为 0.5~5×106 个/ml。
5、 每 25μl 细胞悬液中，加入 1μl AO/EB 工作液，充分混匀。
6、 取洁净载玻片，滴加上 5μl 细胞悬液，轻轻盖上盖玻片。
7、 在荧光显微镜 B 域进行观察。
染色结果
活细胞>>绿色荧光
死细胞>>橙色荧光
注意事项
1、用能通过活细胞膜与 DNA 结合后发蓝色荧光的 Hoechist 33342 和只能通过死细胞与DNA 结合后収红色荧光的碘化吡啶( propidium iodide，PI)对细胞进行双染的方法也比较常用。
2、 如有低温离心机进行离心效果更佳。
3、 操作过程中应注意减少试剂(A)、试剂(B)暴露于强光下的时间。
4、 EB solution 有一定毒性，请小心操作。
5、含酚红培养基对观察有轻微影响。建议使用无酚红培养基。
6、染色液工作浓度和染色时间可根据具体实验情况适当调整，以期达到最佳效果。
7、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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